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Glycotech  協(xié)議 1

微量分離純化方法

Stephan Ladisch~國(guó)家兒童醫(yī)學(xué)中心癌癥和移植生物學(xué)中心主任，華盛頓特區(qū)，22010

這種溶劑分配方法允許從小樣品和濃度低的樣品中分離，特別是相對(duì)于潛在污染蛋白質(zhì)和其他大分子量物質(zhì)的濃度而言。

協(xié)議 2

使用抗抗體的免疫組織化學(xué)

Tadashi Tai~ 東京都醫(yī)學(xué)研究所腫瘤免疫學(xué)系主任，日本東京

使用與二抗偶聯(lián)的免疫熒光的間接方法是一種相對(duì)簡(jiǎn)單、快速和容易的免疫組織化學(xué)方法。除了細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外抗原外，它適合研究膜抗原，并可應(yīng)用于冷凍組織切片、懸浮細(xì)胞以及附著在載玻片或蓋玻片上的細(xì)胞。

協(xié)議 3

使用糖苷內(nèi)切酶對(duì)糖蛋白進(jìn)行去糖基化

TH Plummer, Jr. 和 AL Tarentino，紐約州衛(wèi)生部生物化學(xué)系，Wadsworth 實(shí)驗(yàn)室和研究中心，紐約州奧爾巴尼 12201

去糖基化的參數(shù)隨每種糖蛋白而變化，并且必須憑經(jīng)驗(yàn)確定(Methods in Enzymology, 1994, 230 : 44-57) 。人轉(zhuǎn)鐵蛋白是包含兩條天冬酰胺連接的-巖藻糖基-雙觸角鏈的糖蛋白的一個(gè)例子，即使在 SDS 中變性后，其中一條也僅由內(nèi)切糖苷酶緩慢釋放。描述了對(duì)人轉(zhuǎn)鐵蛋白的典型測(cè)試反應(yīng)。

協(xié)議 4

基于 ELISA 的敏感糖基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定

Bruce A. Macher~舊金山州立大學(xué)化學(xué)和生物化學(xué)教授，加利福尼亞州舊金山 94132

該程序允許使用基于ELISA的程序和碳水化合物特異性單克隆抗體檢測(cè)和量化糖基轉(zhuǎn)移酶活性。該程序避免了使用放射性標(biāo)記的底物，并提供了一種檢測(cè)特定產(chǎn)品的方法。

議定書 5

糖脂的免疫染色薄層色譜圖

John L. Magnani~GlycoTech Corporation, 羅克維爾, 馬里蘭 20850

免疫染色薄層色譜圖可以非常靈敏地檢測(cè)蛋白質(zhì)受體的功能活性碳水化合物配體。在糖脂中檢測(cè)到這些碳水化合物結(jié)構(gòu)，這些糖脂來(lái)自從相關(guān)目標(biāo)組織中提取的分子的復(fù)雜混合物。可以分析的一些蛋白質(zhì)受體是：抗體、嵌合 Ig 蛋白、凝集素、選擇素、毒素和其他碳水化合物結(jié)合蛋白。

議定書 6

高效液相親和色譜法分析寡糖配體

WeiTong Wang~GlycoTech Corporation, Rockville, Maryland 20850

高效液相親和層析 (HPLAC) 是研究碳水化合物結(jié)合蛋白與其配體之間相互作用的有用技術(shù)。HPLAC 的主要應(yīng)用之一是從復(fù)雜的生物混合物中篩選和分離天然配體，例如檢測(cè)、純化和確定體液中碳水化合物配體的結(jié)合常數(shù)。通過(guò)提供快速、靈敏和簡(jiǎn)單的 K D值測(cè)定方法，HPLAC 還可用于合理設(shè)計(jì)和合成新的碳水化合物藥物。

議定書 7

平行板流動(dòng)室中的動(dòng)態(tài)流動(dòng)分析

John T. Patton~GlycoTech Corporation, 羅克維爾, 馬里蘭 20850

F low 測(cè)定允許在明確的壁剪切應(yīng)力下可視化細(xì)胞粘附。細(xì)胞粘附的不同事件的可視化可以通過(guò)選擇性圖像采集和隨后的圖像處理來(lái)量化。流動(dòng)測(cè)定特別適用于研究在比大多數(shù)靜態(tài)粘附測(cè)定更短的時(shí)間尺度內(nèi)非常迅速地發(fā)生的粘附事件。此外，可以研究初始事件之后的事件，例如細(xì)胞穩(wěn)定和擴(kuò)散，從而深入了解特定細(xì)胞-細(xì)胞或細(xì)胞-基質(zhì)粘附行為的動(dòng)力學(xué)。

議定書 8

靜態(tài)條件下細(xì)胞粘附的測(cè)量

John L. Magnani~GlycoTech Corporation, 羅克維爾, 馬里蘭 20850

許多不同的分子已被描述為促進(jìn)細(xì)胞粘附，包括幾種細(xì)胞表面碳水化合物結(jié)合蛋白。由于洗滌孔產(chǎn)生的剪切力，在方便的 96 孔微量滴定板格式中測(cè)量細(xì)胞粘附很困難。該協(xié)議介紹了使用充滿液體的洗滌室，該洗滌室通過(guò)重力分離未結(jié)合的細(xì)胞，從而消除不受控制的剪切力和貼壁細(xì)胞通過(guò)液體/空氣界面的通道。該協(xié)議也可用于分析促進(jìn)或抑制細(xì)胞粘附的分子。

議定書 9

完整細(xì)胞對(duì) TLC 板上已溶解糖脂的碳水化合物特異性粘附

Ronald L. Schnaar~約翰霍普金斯大學(xué)醫(yī)學(xué)院教授，馬里蘭州巴爾的摩市 21205

該程序允許檢測(cè)特定細(xì)胞粘附到 TLC 板上分辨的糖脂。

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其他的這些是菌株

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