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應(yīng)用圖像細(xì)胞儀促進(jìn)生物制品和rAAV生產(chǎn)的細(xì)胞系開發(fā)
基于生物制品和AAV的基因療法在疾病治療方面獲得了更多的市場(chǎng)額。然而，開發(fā)一種強(qiáng)大而高效的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系來生產(chǎn)它們是具有挑戰(zhàn)性的，并且通常需要廣泛的細(xì)胞表征。歷史，流式細(xì)胞儀用于這些基于細(xì)胞的測(cè)定。然而，流式細(xì)胞儀相對(duì)昂貴，并且需要大量的操作和維護(hù)培訓(xùn)。最近，隨著計(jì)算能力和高質(zhì)量相機(jī)傳感器的提高，基于圖像的細(xì)胞術(shù)得到了創(chuàng)新，為細(xì)胞系工藝開發(fā)提供了一種精確且具有成本效益的替代方案。在這項(xiàng)工作中，我們描述了一種細(xì)胞系開發(fā)工作流程，該工作流程結(jié)合了基于圖像的細(xì)胞儀，即Countstar Rigel，用于分別使用表達(dá)抗體和rAAV載體的CHO和HEK293細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染效率評(píng)估和穩(wěn)定池評(píng)估。在兩個(gè)案例研究中，我們證明：
Countstar Rigel提供了與流式細(xì)胞術(shù)相似的檢測(cè)精度。
基于Countstar Rigel的池評(píng)估可以幫助確定單細(xì)胞克?。?span>SCC）所需的組。
Countstar Rigel結(jié)合的細(xì)胞系開發(fā)平臺(tái)實(shí)現(xiàn)了2.5g/L mAb滴度。
我們還討論了使用Countstar作為基于rAAV DoE的優(yōu)化目標(biāo)的另一層的可能性。
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應(yīng)用Countstar FL圖像細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞周期定量分析
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介紹
在細(xì)胞周期分析中，測(cè)量DNA結(jié)合染料的摻入已經(jīng)是確定細(xì)胞DNA含量的認(rèn)方法。碘化丙啶（PI）是一種常用于測(cè)量細(xì)胞周期的核染色染料。在細(xì)胞分裂中，含有增加量的DNA的細(xì)胞顯示出成比例增加的熒光。熒光強(qiáng)度的差異用于確定細(xì)胞周期每個(gè)階段的DNA含量。Countstar Rigel系統(tǒng)（圖1）是一種智能、直觀、多功能的細(xì)胞分析儀器，可以在細(xì)胞周期分析中獲得精確的數(shù)據(jù)，并可以通過細(xì)胞活力測(cè)定檢測(cè)細(xì)胞毒性。易于使用的自動(dòng)化程序可指導(dǎo)您通過成像和數(shù)據(jù)采集完成細(xì)胞測(cè)定。
應(yīng)用Countstar FL圖像細(xì)胞儀研究細(xì)胞毒性
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介紹
細(xì)胞毒性測(cè)定在許多實(shí)驗(yàn)室中被常規(guī)用于各種目的，從評(píng)估細(xì)胞培養(yǎng)物的健康到評(píng)估一組化合物的毒性。用于這些測(cè)定的測(cè)量工具需要可靠、易于使用且相對(duì)快速。Countstar Rigel系統(tǒng)（圖1）是一種智能、直觀的細(xì)胞分析儀器，可簡化各種細(xì)胞測(cè)定，包括轉(zhuǎn)染、凋亡、細(xì)胞表面標(biāo)記、細(xì)胞活力和細(xì)胞周期評(píng)估。該系統(tǒng)提供了穩(wěn)健的熒光定量結(jié)果。易于使用的自動(dòng)化程序可指導(dǎo)您完成細(xì)胞測(cè)定形式的成像和數(shù)據(jù)采集。
使用293和碘化丙啶的GFP轉(zhuǎn)染效率測(cè)定
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介紹
綠色熒光蛋白（GFP）是一種由238個(gè)氨基酸殘基（26.9kDa）組成的蛋白質(zhì)，當(dāng)暴露于藍(lán)色至紫外線范圍的光時(shí)表現(xiàn)出明亮的綠色熒光。在細(xì)胞和分子生物學(xué)中，GFP基因經(jīng)常被用作表達(dá)的報(bào)告基因。在修飾的形式中，它已被用于制造生物傳感器，并且已經(jīng)創(chuàng)造了許多表達(dá)GFP的動(dòng)物，作為基因可以在給定的生物體中表達(dá)的概念證明，或者在選定的器官、細(xì)胞或興趣中表達(dá)。GFP可以通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)引入動(dòng)物或其他物種，并保留在它們及其后代的基因組中。
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